Otoklav sterilizasyonu üç farklı aşamadan oluşur:
Havanın Çıkarılması: Bu ilk aşamada, otoklav haznedeki havayı uzaklaştırır. Bir vakum pompası havayı emerek düşük basınçlı bir ortam yaratır. Bu adım, buharın tüm alanlara etkili bir şekilde nüfuz etmesini ve uygun sterilizasyon için yüke ulaşmasını sağlar.
Sterilizasyon: Hava çıkarıldıktan sonra otoklavın içindeki sıcaklık doğru seviyeye ulaşır. Basınç altında üretilen doymuş buhar bakterileri, virüsleri ve diğer mikroorganizmaları öldürür. Sterilizasyon için olağan sıcaklık, 1,1 kilogram/santimetre kare (kg/cm²) (15 pound/inç kareye (lb/in²) eşdeğer) basınçta 121 derecedir. Otoklavlamanın süresi yükün hacmine bağlı olarak değişir ancak genellikle 15-20 dakika olarak kabul edilir.
Soğutma/Kurutma: Sterilizasyondan sonra buhar serbest bırakılır ve otoklav soğur. Sıcaklık güvenli hale geldiğinde kapı açılır ve sterilize edilen ürünler kullanıma hazırdır.
Başarılı bir otoklav sterilizasyonu için etkili hava tahliyesi, eşyaların doğru konumlandırılması ve yeterli ısıtma süresi çok önemlidir.